在现代生物科学研究中，定量实时聚合酶链反应（Quantitative PCR, qPCR）作为一种重要的分子生物学技术，被广泛应用于基因表达分析、病原体检测以及遗传变异研究等领域。然而，qPCR实验的成功与否很大程度上取决于引物的设计质量。因此，开发出一款在线设计高效qPCR引物的便捷工具，对于提高科研效率和准确性具有重要意义。 ### 一、引物设计的基本原则 1. **特异性**：引物应与目标序列高度特异结合，避免非特异性扩增。 2. **等长性**：引物长度应相近，以保证扩增效率。 3.